การออกแบบทดลอง

 หนูทั้งหมด 21 ตัวถูกสุ่มแบ่งออกเป็นสามกลุ่ม: (i) หนูควบคุม (n = 7) (ii) MIA หนูควบคุมข้ออักเสบ (MIA) (n = 7) และ (iii) MIA+UC-II UC-II® (4 มก./BW/วัน) เสริมหนูที่เป็นโรคข้ออักเสบ (n = 7) แบบจำลองหนู OA ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (15) เพื่อกระตุ้นแบบจำลองหนู OA หัวเข่าขวาของหนูถูกโกนและฆ่าเชื้อด้วยแอลกอฮอล์ 70% หลังจากการดมยาสลบโดยใช้ไซลาซีน (10 มก./กก.) และคีตามีนไฮโดรคลอไรด์ (50 มก./กก.) MIA 1 มก. (ซิกมา, เซนต์หลุยส์, สหรัฐอเมริกา) ละลายในน้ำเกลือ 50 ไมโครลิตร และฉีดเข้าไปในข้อเข่าขวาผ่านเอ็น infrapatellar โดยใช้เข็มฉีดยาอินซูลิน 0.3 มล. ที่ใส่เข็ม 29-G (15) น้ำเกลือ (50 ไมโครลิตร) ถูกฉีดเข้าไปในข้อเข่าขวาผ่านเอ็น infra-patellar ในกลุ่มควบคุม เริ่มหนึ่งสัปดาห์ก่อนฉีดด้วย MIA อาหารเสริม UC-II® (Lonza Consumer Health Inc, USA) จะได้รับทุกวันจนถึงวันที่ 30 สำหรับหนู ให้คำนวณขนาดยา BW UC-II® ขนาด 4 มก. โดยอิงจากขนาด 40 มก. /กก. ปริมาณเทียบเท่ามนุษย์ตามการศึกษาก่อนหน้านี้ (16) หนูทุกตัวถูกสังเกตวันเว้นวันเพื่อประเมินอาการบวมที่ข้อเข่า หลังจากสิ้นสุดการเสริม UC-II ยูซีทูคืออะไร  30 วัน หนูก็ถูกสังเวย และรวบรวมเลือดและตัวอย่างกระดูกอ่อนข้อสำหรับการทดลองติดตามผล

การวิเคราะห์ในห้องปฏิบัติการ

ตัวอย่างเลือดถูกหมุนเหวี่ยงที่ 3,000 รอบต่อนาที เป็นเวลา 10 นาที และซีรั่มที่เก็บเกี่ยวถูกเก็บไว้ที่ −80°C จนถึงวันที่ทำการวิเคราะห์ ระดับกลูโคสในเลือด ครีเอตินีน ยูเรียไนโตรเจนในเลือด (BUN) โปรตีนทั้งหมด (TP) โกลบูลิน (GLOB) อะลานีนอะมิโนทรานสเฟอเรส (ALT) แอสพาเทตอะมิโนทรานสเฟอเรส (AST) อัลคาไลน์ฟอสฟาเตส (ALP) และบิลิรูบินรวม (TBIL) วัดโดยเครื่องวิเคราะห์อัตโนมัติ (Samsung Electronics, Suwon, Korea) โดยใช้ชุดอุปกรณ์เฉพาะสำหรับหนู

ระดับซีรั่มของ TNF-α, IL-1β, IL-6, โปรตีนโอลิโกเมอร์เมทริกซ์ของกระดูกอ่อน (COMP), โปรตีน c-reactive (CRP), พรอสตาแกลนดิน E2 (PGE2) และ osteocalcin (OCN) ถูกกำหนดหาด้วยชุดเครื่องมือ ELISA ตาม คำแนะนำของผู้ผลิต อ่านความหนาแน่นเชิงแสงของตัวอย่างโดยใช้เครื่องอ่านไมโครเพลท (Elx-800, Bio-Tek Instruments Inc, Vermont, USA) ที่ความยาวคลื่น 405 นาโนเมตร เส้นโค้งมาตรฐานถูกสร้างขึ้นโดยใช้ค่าความหนาแน่นเชิงแสงของสารละลายมาตรฐานสำหรับพารามิเตอร์เหล่านี้ วัดความเข้มข้นของ MDA ในซีรัมโดยใช้ HPLC แบบอัตโนมัติเต็มรูปแบบ (Shimadzu, Kyoto, Japan) ที่ติดตั้งปั๊ม (LC-20AD) เครื่องตรวจจับรังสีอัลตราไวโอเลตที่มองเห็นได้ (SPD-20A) คอลัมน์ ODS-3 C18 เฉื่อย (250 × 4.6 มม. , 5 ม.), เตาอบแบบเสา (CTO-10ASVP), เครื่องเก็บตัวอย่างอัตโนมัติ (SIL-20A), เครื่องกำจัดแก๊ส (DGU-20A5) และระบบคอมพิวเตอร์พร้อมซอฟต์แวร์ LC solution (Shimadzu, Kyoto, Japan) กิจกรรมของ superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT) และ glutathione peroxidase (GSH-Px) ถูกกำหนดโดยใช้ชุดเครื่องมือที่มีขายทั่วไป (Cayman Chemical, Ann Arbor, MI, USA) ตามขั้นตอนของผู้ผลิต

การทดสอบการเดินและการบวมของข้อ

อุ้งเท้าหลังของหนูถูกแปรงด้วยหมึกสีน้ำเงินเข้มเพื่อทำการวิเคราะห์การเดิน จากนั้นให้หนูเดินบนกระดาษขาว (ยาว 60 ซม. กว้าง 7 ซม.) ห้องมืดถูกวางไว้ที่ปลายรางเพื่อล่อหนู รอยเท้าของหนูถูกสแกนที่ 300 dpi และคำนวณด้วยซอฟต์แวร์ Image J (National Institutes of Health, USA) ที่ใช้ในการวิเคราะห์พื้นที่อุ้งเท้า (cm2), ความกว้างของอุ้งเท้า (ซม.) และความยาวก้าว (ซม.) ยูซีทู Collagen  การวัด (17) หลังจากแผลเป็น เข่าขวาถูกแยกออก และกระดูกโคนขา กระดูกหน้าแข้ง และสะบ้าถูกผ่าออกโดยไม่มีกล้ามเนื้อ เส้นผ่านศูนย์กลาง (มม.) วัดอย่างน้อยสามครั้งโดยใช้คาลิปเปอร์แบบดิจิตอล (Mitutoyo, Kawasaki, Japan) เพื่อตรวจสอบการบวมของข้อต่อ